環境微生物監測標準操作規程

（一）監測指征

1、感染暴發或感染流行時，懷疑與環境因素有關時。

2、監測潛在的危險環境狀況，證明有危險的病原體存在或證明危險的病原體已被成功清除。

3、當某項感染控制措施改變時，評估其效果；或者根據規范要求，儀器設備或系統啟用時監測。

4、目標性監測的需要。

5、循證醫學證據支持。

（二）空氣監測(沉降法)

1、采樣時間：消毒處理后、進行醫療活動之前。

2、采樣高度：距地面垂直高度80～150cm。

3、采樣點設置

1）非潔凈房間：室內面積≤30㎡，在對角線上設里、中、外3點。里、外兩點位置各距墻1m；室內面積>30㎡，設東、西、南、北、中5點。其中東、西、南、北4點均距墻1m。將9cm直徑普通營養瓊脂平板放置各采樣點，采樣時將平皿打開，扣放在平皿旁，暴露規定時間后，蓋上平皿蓋及時送檢。

2）潔凈房間：清潔房間在空態或靜態條件下，根據房間的不同清潔級別進行布點，操作按照GB/50333—2002。9cm直徑普通營養瓊脂平板在采樣點暴露30min后送檢培養。

4、采樣注意事項

1）采樣前，關閉門窗，消毒后在無人走動的情況下，靜止10 min后采樣。

2）采樣人員做好手部衛生，佩戴口罩、帽子等個人防護裝備。

3）平皿蓋打開順序應先內后外；手臂及頭不可越過培養皿上方；行走及放置動作要輕，盡量減少對空氣流動狀態的影響；平皿蓋應扣放，以防污染。

4）采樣結束后，由外向內合上平皿蓋。

5）采樣完畢的培養皿應及時送達細菌室。

5、細菌室檢測

1．培養皿在37℃培養48h后，進行菌落計數和致病菌檢驗。

(1）普通營養瓊脂培養基的配制按照GB／—2003；

(2)菌落計數方法按照2012年8月1日實施《醫療機構消毒技術規范》要求：沉降法按平均每皿的菌落數報告：cfu/（皿.暴露時間）；

(3)致病菌檢驗：溶血性鏈球菌檢驗按照GB／—2003，沙門菌檢驗按照CB/—2003，銅綠假單胞菌檢驗按照GB／—1987，金黃色葡萄球菌檢驗按照CB/—1987。

6、結果判斷：

1）潔凈手術部和其他潔凈場所：空氣中的細菌菌落總數要求應遵循GB/50333規定。

2）非潔凈手術室、非潔凈骨髓移植病房、產房、導管室、新生兒室、器官移植病房、燒傷病房、重癥監護病房、血液病病區空氣中的細菌菌落總數≤4cfu/15min。

3）兒科病房、母嬰同室、婦科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應中心、血液透析中心（室）、急診室、化驗室、各普通病室、感染疾病科門診及病房空氣中的細菌菌落總數≤4cfu/5min。

（三）物體表面監測

1、采樣時間：

1）消毒處理后4h內。

2）懷疑與醫院感染暴發有關時。

2、采樣方法

被采樣本面積<100c㎡取全部表面；如采樣面積≥100c㎡，連續采樣4個位置(不可有重疊)，每個位置采5cm×5cm的大小，用浸有無菌生理鹽水的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉動棉拭子，將棉拭子投入10ml無菌生理鹽水試管內；不規則的物體表面，用棉拭子直接涂擦，采樣面積≥30c㎡

3、實驗室檢驗

1）取1mL傾注培養，平行雙份。37℃培養48h，進行菌落計數和致病菌檢驗。普通營養瓊脂培養基的配制按照GB／T4789．28—2003；菌落計數方法按照(3B／T7918．2—1987；致病菌檢驗與空氣監測相同。

2）計算公式：

A、規則物體表面：細菌總數(cfu／c㎡)=(平均每皿菌落數×洗脫液稀釋倍數)／采樣面積(c㎡。)

B、小型物體表面：用CFU/件表示。

4、結果判斷：參照2012年8月1日實施《醫療機構消毒技術規范》。

1）潔凈手術部、其它潔凈場所、非潔凈手術部、非潔凈骨髓移植病房、產房、導管室、新生兒室、器官移植病房、燒傷病房、重癥監護病房、血液病病區物體表面細菌菌落總數≤5cfu/cm².

2）兒科病房、母嬰同室、婦科檢查室、人流室、治療室、注射室、換藥室、輸血科、消毒供應中心、血液透析中心（室）、急診室、化驗室、各普通病室、感染疾病科門診及病房物體表面細菌菌落總數≤10cfu/ cm²。